Identification and characterization of two types of ... - Bioscience Reports

Bioscience Reports: this is an Accepted Manuscript, not the final Version of Record. You are encouraged to use the Version of Record that, when published, will replace this version. The most up-to-date version is available at http://dx.doi.org/10.1042/BSR20170157. Please cite using the DOI 10.1042/BSR20170157 

/ĚĞŶƚŝĨŝĐĂƚŝŽŶĂŶĚĐŚĂƌĂĐƚĞƌŝnjĂƚŝŽŶŽĨƚǁŽƚLJƉĞƐŽĨĂŵŝŶŽĂĐŝĚͲ ƌĞŐƵůĂƚĞĚĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞƐŝŶĂĐƚŝŶŽďĂĐƚĞƌŝĂ  ϭξ ϭξ zƵͲyŝŶŐ>Ƶ ͕yŝŶͲyŝŶ>ŝƵ ͕tĞŝͲŝŶ>ŝƵϭ͕ĂŶŐͲĞzĞΎϭ͕Ϯ  ϭ

>ĂďŽĨŝŽƐLJƐƚĞŵƐĂŶĚDŝĐƌŽĂŶĂůLJƐŝƐ͕ŝŽŵĞĚŝĐĂůEĂŶŽƚĞĐŚŶŽůŽŐLJĞŶƚĞƌ͕^ƚĂƚĞĂďŽƌĂƚŽƌLJ

ŽĨŝŽƌĞĂĐƚŽƌŶŐŝŶĞĞƌŝŶŐ͕ĂƐƚŚŝŶĂhŶŝǀĞƌƐŝƚLJŽĨ^ĐŝĞŶĐĞĂŶĚdĞĐŚŶŽůŽŐLJ͕^ŚĂŶŐŚĂŝ͕ϮϬϬϮϯϳ͕ ŚŝŶĂ Ϯ

^ĐŚŽŽůŽĨŚĞŵŝƐƚƌLJĂŶĚŚĞŵŝĐĂůŶŐŝŶĞĞƌŝŶŐ͕^ŚŝŚĞnjŝhŶŝǀĞƌƐŝƚLJ͕yŝŶũŝĂŶŐ͕ϴϯϮϬϬϬ͕ŚŝŶĂ

ξ

dŚĞƐĞĂƵƚŚŽƌƐĐŽŶƚƌŝďƵƚĞĚĞƋƵĂůůLJ͘

   

ĂŶŐͲĞzĞ WƌŽĨĞƐƐŽƌ͕>ĂďŽĨŝŽƐLJƐƚĞŵƐĂŶĚDŝĐƌŽĂŶĂůLJƐŝƐ͕ ^ƚĂƚĞĂďŽƌĂƚŽƌLJŽĨŝŽƌĞĂĐƚŽƌŶŐŝŶĞĞƌŝŶŐ͕ ĂƐƚŚŝŶĂhŶŝǀĞƌƐŝƚLJŽĨ^ĐŝĞŶĐĞĂŶĚdĞĐŚŶŽůŽŐLJ͕^ŚĂŶŐŚĂŝ͕ϮϬϬϮϯϳ͕ŚŝŶĂ͘ dĞůͬ&Ădž͗ϬϬϴϲͲϮϭͲϲϰϮϱϮϬϵϰ ŵĂŝů͗ďĐLJĞΛĞĐƵƐƚ͘ĞĚƵ͘ĐŶ

 



Use of open access articles is permitted based on the terms of the specific Creative Commons Licence under which the article is published. Archiving of non-open access articles is permitted in accordance with the Archiving Policy of Portland Press ( http://www.portlandpresspublishing.com/content/open-access-policy#Archiving).

ACCEPTED MANUSCRIPT

dŽǁŚŽŵĐŽƌƌĞƐƉŽŶĚĞŶĐĞƐŚŽƵůĚďĞĂĚĚƌĞƐƐĞĚ͗



^dZd KŶĞŚƵŶĚƌĞĚĂŶĚĨŝĨƚLJ'EϱͲůŝŬĞĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞƐǁŝƚŚĂŵŝŶŽĂĐŝĚͲďŝŶĚŝŶŐ ;dͿͲ'EϱͲƌĞůĂƚĞĚ EͲĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞ'EdͿĚŽŵĂŝŶŽƌŐĂŶŝnjĂƚŝŽŶŚĂǀĞďĞĞŶŝĚĞŶƚŝĨŝĞĚŝŶĂĐƚŝŶŽďĂĐƚĞƌŝĂ͘dŚĞd

ĚŽŵĂŝŶ ŝƐ ĨƵƐĞĚ ƚŽ ƚŚĞ 'Ed ĚŽŵĂŝŶ͕ ĐŽŶĨĞƌƌŝŶŐ ĂŵŝŶŽ ĂĐŝĚͲŝŶĚƵĐĞĚ ĂůůŽƐƚĞƌŝĐ ƌĞŐƵůĂƚŝŽŶ ƚŽ ƚŚĞƐĞ ƉƌŽƚĞŝŶ ĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞƐ ;WĂƚͿ͘ DĞŵďĞƌƐ ŽĨ ƚŚĞ WĂƚ ĨĂŵŝůLJ ƐŚĂƌĞ ƐŝŵŝůĂƌ ƐĞĐŽŶĚĂƌLJƐƚƌƵĐƚƵƌĞĂŶĚĂƌĞĚŝǀŝĚĞĚŝŶƚŽƚǁŽŐƌŽƵƉƐďĂƐĞĚŽŶƚŚĞĂůůŽƐƚĞƌŝĐůŝŐĂŶĚƐŽĨƚŚĞd ĚŽŵĂŝŶ͗ƚŚĞ ĂƐƉĂƌĂŐŝŶĞͲĂĐƚŝǀĂƚĞĚ WĂƚ ĂŶĚ ƚŚĞ ĐLJƐƚĞŝŶĞͲĂĐƚŝǀĂƚĞĚ WĂƚ͘ dŚĞ ĨŽƌŵĞƌ ĂƌĞ ŵĂŝŶůLJ ĨŽƵŶĚ ŝŶ ^ƚƌĞƉƚŽŵLJĐĞƐ͖ ƚŚĞ ůĂƚƚĞƌ ĂƌĞ ĚŝƐƚƌŝďƵƚĞĚ ŝŶ ŽƚŚĞƌ ĂĐƚŝŶŽďĂĐƚĞƌŝĂ͘ tĞ ŝŶǀĞƐƚŝŐĂƚĞĚ ƚŚĞ ĞĨĨĞĐƚŽĨĂƐƉĂƌĂŐŝŶĞ;ƐŶͿĂŶĚĐLJƐƚĞŝŶĞ;LJƐͿŽŶƚŚĞĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶĂĐƚŝǀŝƚLJŽĨ^ǀĞŶͺϬϴϲϳ;^ǀĞWĂƚ͕ ĨƌŽŵ ^ƚƌĞƉƚŽŵLJĐĞƐ ǀĞŶĞnjƵĞůĂĞ ^D ϰϬϮϯϬͿ ĂŶĚ ŵŝƌͺϱϲϳϮ ;ŵŝWĂƚ͕ ĨƌŽŵ ĐƚŝŶŽƐLJŶŶĞŵĂ ŵŝƌƵŵ ƐƚƌĂŝŶ ^D ϰϯϴϮϳͿ ƌĞƐƉĞĐƚŝǀĞůLJ͕ ĂƐ ǁĞůů ĂƐ ƚŚĞ ƌĞůĂƚŝŽŶƐŚŝƉ ďĞƚǁĞĞŶ ƚŚĞ ƐƚƌƵĐƚƵƌĞ ĂŶĚ ĨƵŶĐƚŝŽŶŽĨƚŚĞƐĞĞŶnjLJŵĞƐ͘dŚĞƐĞĨŝŶĚŝŶŐƐŝŶĚŝĐĂƚĞƚŚĂƚƚŚĞĂĐƚŝǀŝƚLJŽĨWĂƚĂŶĚĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶůĞǀĞů ŽĨ ƉƌŽƚĞŝŶƐ ŵĂLJ ďĞ ĐůŽƐĞůLJ ĐŽƌƌĞůĂƚĞĚ ǁŝƚŚ ŝŶƚƌĂĐĞůůƵůĂƌ ĐŽŶĐĞŶƚƌĂƚŝŽŶƐ ŽĨ ƐŶ ĂŶĚ LJƐ ŝŶ ĂĐƚŝŶŽďĂĐƚĞƌŝĂ͘ŵŝŶŽĂĐŝĚͲƐĞŶƐŝŶŐƐŝŐŶĂůƚƌĂŶƐĚƵĐƚŝŽŶŝŶĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞƐŵĂLJďĞĂŵĞĐŚĂŶŝƐŵ ƚŚĂƚƌĞŐƵůĂƚĞƐƉƌŽƚĞŝŶĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶŝŶƌĞƐƉŽŶƐĞƚŽŶƵƚƌŝĞŶƚĂǀĂŝůĂďŝůŝƚLJ͘&ƵƚƵƌĞǁŽƌŬĞdžĂŵŝŶŝŶŐƚŚĞ ƌĞůĂƚŝŽŶƐŚŝƉ ďĞƚǁĞĞŶ ƉƌŽƚĞŝŶ ĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶ ĂŶĚ ĂŵŝŶŽ ĂĐŝĚ ŵĞƚĂďŽůŝƐŵ ǁŝůů ďƌŽĂĚĞŶ ŽƵƌ ƵŶĚĞƌƐƚĂŶĚŝŶŐŽĨƉŽƐƚͲƚƌĂŶƐůĂƚŝŽŶĂůŵŽĚŝĨŝĐĂƚŝŽŶƐŝŶĨĞĞĚďĂĐŬƌĞŐƵůĂƚŝŽŶ͘   ^EDd,K^ ^ƚƌĂŝŶƐĂŶĚƌĞĂŐĞŶƚƐ ůůƐƚƌĂŝŶƐǁĞƌĞƉƵƌĐŚĂƐĞĚĨƌŽŵƚŚĞŚŝŶĂ'ĞŶĞƌĂůDŝĐƌŽďŝŽůŽŐŝĐĂůƵůƚƵƌĞŽůůĞĐƚŝŽŶĞŶƚĞƌ ;'DͿ͘ ůů ƚŚĞ ƌĞĂŐĞŶƚƐ͕ ƉƵƌĐŚĂƐĞĚ ĨƌŽŵ ^ŝŐŵĂ͕ ǁĞƌĞ ŽĨ ƚŚĞ ŚŝŐŚĞƐƚ ŐƌĂĚĞ ĐŽŵŵĞƌĐŝĂůůLJ ĂǀĂŝůĂďůĞ͘ ŽŶƐƚƌƵĐƚŝŽŶŽĨƉůĂƐŵŝĚƐĂŶĚŽǀĞƌĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶĂŶĚƉƵƌŝĨŝĐĂƚŝŽŶŽĨƉƌŽƚĞŝŶƐ ůůƉĂƚĂŶĚŚŽŵŽůŽŐŽƵƐ ĂĐƐŐĞŶĞƐĐŽĚŝŶŐĨŽƌĂĐĞƚLJůͲŽƐLJŶƚŚĞƚĂƐĞǁĞƌĞĂŵƉůŝĨŝĞĚďLJWZ ƵƐŝŶŐŐĞŶŽŵŝĐEĨƌŽŵďĂĐƚĞƌŝĂůƐƚƌĂŝŶƐ͘ ĨƚĞƌĚŝŐĞƐƚŝŽŶǁŝƚŚƌĞƐƚƌŝĐƚŝŽŶĞŶnjLJŵĞƐ͕ŐĞŶĞƐĐŽĚŝŶŐ ĨŽƌ WĂƚ ĂŶĚ ĐƐ ƉƌŽƚĞŝŶƐ ǁĞƌĞ ůŝŐĂƚĞĚ ŝŶƚŽ ƉdͲϮϴĂ͕ ǁŚŝĐŚ ǁĂƐ ƉƌĞĚŝŐĞƐƚĞĚ ǁŝƚŚ ĐŽZ/ ĂŶĚ ,ŝŶĚ///͕ŐĞŶĞƌĂƚŝŶŐ ƉdϮϴĂͲWĂƚĂŶĚƉdϮϴĂͲĐƐ͘dŚĞŽǀĞƌĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶĂŶĚƉƵƌŝĨŝĐĂƚŝŽŶŽĨƉƌŽƚĞŝŶƐ ŝŶ ƚŚĞ ͘ ĐŽůŝ >ϮϭͲϯ ǁĂƐ ƉĞƌĨŽƌŵĞĚ ĂƐ ĚĞƐĐƌŝďĞĚ ƉƌĞǀŝŽƵƐůLJ ΀ϭϮ΁͘ WƌŽƚĞŝŶ ĐŽŶĐĞŶƚƌĂƚŝŽŶ ǁĂƐ ĚĞƚĞƌŵŝŶĞĚƵƐŝŶŐƚŚĞďŝĐŝŶĐŚŽŶŝŶŝĐĂĐŝĚ;ͿŵĞƚŚŽĚ͘ ĐĞƚLJůĂƚŝŽŶĂĐƚŝǀŝƚLJĂŶĚƐƚĞĂĚLJͲƐƚĂƚĞŬŝŶĞƚŝĐĂƐƐĂLJŽĨWĂƚĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞƐ ĐĞƚLJůĂƚŝŽŶĂĐƚŝǀŝƚLJŽĨĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞƐǁĂƐŵĞĂƐƵƌĞĚĐŽŶƚŝŶƵŽƵƐůLJďLJĂĐŽƵƉůĞĚĞŶnjLJŵĂƚŝĐ ĂƐƐĂLJƵƐŝŶŐĂĨůƵŽƌĞƐĐĞŶĐĞƉůĂƚĞƌĞĂĚĞƌ;ŝŽͲdĞŬ/ŶƐƚƌƵŵĞŶƚ͕tŝŶŽŽƐŬŝ͕h^Ϳ͘dŚĞƉƌŽĚƵĐƚŝŽŶŽĨ ŽŝƐŵĞĂƐƵƌĞĚƵƐŝŶŐƉLJƌƵǀĂƚĞĚĞŚLJĚƌŽŐĞŶĂƐĞͲŵĞĚŝĂƚĞĚƌĞĚƵĐƚŝŽŶŽĨEнƚŽE,͕ƌĞƐƵůƚŝŶŐ ŝŶĂŶŝŶĐƌĞĂƐĞŽĨĂďƐŽƌďĂŶĐĞĂƚϯϰϬŶŵ΀ϭϯ͕ϭϰ΁͘dŚĞŽƉƚŝŵŝnjĂƚŝŽŶŽĨƚŚĞĞŶnjLJŵĞͲĐŽƵƉůĞĚĂƐƐĂLJ ĂŶĚ ƐƚĞĂĚLJͲƐƚĂƚĞ ŬŝŶĞƚŝĐ ĂŶĂůLJƐŝƐ ŽĨ WĂƚ ĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞƐ ǁĞƌĞ ƉĞƌĨŽƌŵĞĚ ĂƐ ĚĞƐĐƌŝďĞĚ ƉƌĞǀŝŽƵƐůLJ΀ϭϮ΁͘ tĞƐƚĞƌŶďůŽƚƚŝŶŐĂƐƐĂLJƐĂŶĚƉĞƉƚŝĚĞĨŝŶŐĞƌƉƌŝŶƚŝŶŐƵƐŝŶŐŵĂƐƐƐƉĞĐƚƌŽŵĞƚƌLJ WƌŽƚĞŝŶƐĂŵƉůĞƐǁĞƌĞĞůĞĐƚƌŽƉŚŽƌĞƐĞĚŽŶĂ^^ͲW'ĂŶĚƚŚĞŶƚƌĂŶƐĨĞƌƌĞĚƚŽĂƉŽůLJǀŝŶLJůŝĚĞŶĞ ĚŝĨůƵŽƌŝĚĞ ;Ws&Ϳ ŵĞŵďƌĂŶĞ ĨŽƌ ϭ Ś Ăƚ ϭϬϬ s͘ dŚĞ ŵĞŵďƌĂŶĞ ǁĂƐ ďůŽĐŬĞĚ ŝŶ ďŽǀŝŶĞ ƐĞƌƵŵ

ĂůďƵŵŝŶ;^ͿďůŽĐŬŝŶŐďƵĨĨĞƌĨŽƌϮŚĂƚϮϱΣ͘tĞƵƐĞĚĂŶĂĐĞƚLJůͲůLJƐŝŶĞĂŶƚŝďŽĚLJ;Ăƚη/WϬϯϴϭ͕ /ŵŵƵŶĞŚĞŵWŚĂƌŵĂĐĞƵƚŝĐĂůƐ/ŶĐ͘ĂŶĂĚĂͿĚŝůƵƚĞĚϭ͗ϭϱ͕ϬϬϬ͘ĨƚĞƌŝŶĐƵďĂƚŝŽŶĂƚϰΣĨŽƌϭϬƚŽϭϮ Ś͕ ƚŚĞ ďůŽƚ ǁĂƐ ǁĂƐŚĞĚ ǁŝƚŚ ƚƌŝƐͲďƵĨĨĞƌĞĚ ƐĂůŝŶĞ ĂŶĚ dǁĞĞŶ ϮϬ ;d^dͿ ƚŚƌĞĞ ƚŝŵĞƐ Ăƚ ĂŵďŝĞŶƚ ƚĞŵƉĞƌĂƚƵƌĞ͘ ŚĞŵŝůƵŵŝŶĞƐĐĞŶĐĞ ǁĂƐ ĚĞƚĞĐƚĞĚ ƵƐŝŶŐ ƚŚĞ > ĞŶŚĂŶĐĞĚ ƐLJƐƚĞŵ ĂŶĚ Ă ůƵŵŝŶĞƐĐĞŶƚ ŝŵĂŐĞ ĂŶĂůLJnjĞƌ ;EZ ŝŽͲ/ŵĂŐŝŶŐ ^LJƐƚĞŵƐ͕ /ƐƌĂĞůͿ͘ dŽ ĐŽŶƚŝŶƵŽƵƐůLJ ŵŽŶŝƚŽƌ ƚŚĞ ĂĐĞƚLJůͲůLJƐŝŶĞ ƐŝƚĞƐ͕ ƚŚĞ ĂĐĞƚLJůĂƚĞĚ ĐƐ ǁĞƌĞ ŝƐŽůĂƚĞĚ ƵƐŝŶŐ ^^ͲW' ĂŶĚ ƉƌŽƚĞŝŶƐ ǁĞƌĞ ƐŽůƵďŝůŝnjĞĚĂĐĐŽƌĚŝŶŐƚŽƉƌĞǀŝŽƵƐůLJĚĞƐĐƌŝďĞĚĨŝůƚĞƌͲĂŝĚĞĚƐĂŵƉůĞƉƌĞƉĂƌĂƚŝŽŶ;&^WͿƉƌŽĐĞĚƵƌĞƐ ΀ϭϱ΁͘WƌĞĚŝŐĞƐƚĞĚƉƌŽƚĞŝŶƐǁĞƌĞĞdžƚƌĂĐƚĞĚďLJƐŽůŝĚͲƉŚĂƐĞĞdžƚƌĂĐƚŝŽŶ͕ƐĞƉĂƌĂƚĞĚƵƐŝŶŐEĂŶŽͲ,W>͕ ĂŶĚ ĂŶĂůLJnjĞĚ ŽŶ ĂŶ KƌďŝƚƌĂƉ &ƵƐŝŽŶdD dƌŝďƌŝĚdD DĂƐƐ ^ƉĞĐƚƌŽŵĞƚĞƌ ;dŚĞƌŵŽ ^ĐŝĞŶƚŝĨŝĐ͕ h^Ϳ͘ dĂŶĚĞŵ ŵĂƐƐ ƐƉĞĐƚƌŽŵĞƚƌLJ ;D^ͬD^Ϳ ƐƉĞĐƚƌĂ ǁĞƌĞ ƐĞĂƌĐŚĞĚ ƵƐŝŶŐ ƚŚĞ D^Kd ĞŶŐŝŶĞ ;ǀĞƌƐŝŽŶ

Ϯ͘Ϯ͖DĂƚƌŝdž^ĐŝĞŶĐĞ͕hŶŝƚĞĚLJƐϭϭϮ͕ WƌŽϭϭϯ͕ 'ůƵϭϭϰ͕ ĂŶĚ LJƐϭϯϵ ;&ŝŐ͘ ϳͿ͘ dŽ ĨƵƌƚŚĞƌŝĚĞŶƚŝĨLJƚŚĞŬĞLJƌĞƐŝĚƵĞƐŝŶǀŽůǀĞĚŝŶƚŚĞďŝŶĚŝŶŐŽĨƐŶ͕ǁĞŵƵƚĂƚĞĚƚŚĞĂĐŝĚŝĐĂŵŝŶŽĂĐŝĚ >LJƐϭϭϮ ĂŶĚ ĂŵŝŶŽ ĂĐŝĚ WƌŽϭϭϯ ƚŽ ůĂ͘ ůůŽƐƚĞƌŝĐ ĞĨĨĞĐƚ ŽĨ ƐŶ ŽŶ ^ǀĞWĂƚ ĂĐƚŝǀŝƚLJ ǁĂƐ Ɛƚŝůů ŽďƐĞƌǀĞĚŝŶƚǁŽŵƵƚĂŶƚƐLJƐϭϭϮĂŶĚWƌŽϭϭϯǁĂƐŶŽƚ ŝŶǀŽůǀĞĚŝŶƚŚĞƐŶͲďŝŶĚŝŶŐŽĨ^ǀĞWĂƚ͘ 





/^h^^/KE EͲůLJƐŝŶĞĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶŝƐĂĚLJŶĂŵŝĐ͕ƌĞǀĞƌƐŝďůĞ͕ĂŶĚƌĞŐƵůĂƚŽƌLJƉŽƐƚͲƚƌĂŶƐůĂƚŝŽŶĂůŵŽĚŝĨŝĐĂƚŝŽŶ;WdDͿ ƵƐĞĚƚŽŵŽĚƵůĂƚĞĞŶnjLJŵĞĂĐƚŝǀŝƚLJŝŶƉƌŽŬĂƌLJŽƚĞƐ͘ĐĐƵŵƵůĂƚŝŶŐĞǀŝĚĞŶĐĞƐƵŐŐĞƐƚƐƚŚĂƚŵĞƚĂďŽůŝĐ ŶĞƚǁŽƌŬƐĂƌĞĐŽŽƌĚŝŶĂƚĞĚǀŝĂƌĞǀĞƌƐŝďůĞĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶŽĨĞŶnjLJŵĞƐƚŚĂƚƌĞŐƵůĂƚĞĐĞůůƵůĂƌŵĞƚĂďŽůŝƐŵ ƚŽ ŵĂŝŶƚĂŝŶ ŚŽŵĞŽƐƚĂƐŝƐ ŝŶ ƚŚĞ ƌĂƉŝĚůLJ ĐŚĂŶŐŝŶŐ ŵŝĐƌŽĞŶǀŝƌŽŶŵĞŶƚ͘ dŚŝƐ ƐƚƵĚLJ ĞdžĂŵŝŶĞĚ ƚŚĞ ĂƌĐŚĞƚLJƉŝĐĂůĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞƐWĂƚƐƉŽƐƐĞƐƐŝŶŐĂ'EdĂŶĚdĚŽŵĂŝŶƐ͕ĂŶĚƐŚŽǁƐĂŶŽǀĞů ƐŝŐŶĂůŝŶŐƉĂƚŚǁĂLJĨŽƌƌĞŐƵůĂƚŝŶŐƚŚĞĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶŽĨĐĞůůƵůĂƌƉƌŽƚĞŝŶƐ͘dŚĞƐĞĨŝŶĚŝŶŐƐŝŶĚŝĐĂƚĞƚŚĂƚ ŝŶĂĐƚŝŶŽďĂĐƚĞƌŝĂ͕ĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞĂĐƚŝǀŝƚLJĂŶĚƉƌŽƚĞŝŶĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶŵĂLJďĞƚŝŐŚƚůLJĐŽƌƌĞůĂƚĞĚǁŝƚŚ ŝŶƚƌĂĐĞůůƵůĂƌĂŵŝŶŽĂĐŝĚŵĞƚĂďŽůŝƐŵ͘ ɸ

dŚĞ ĐŽŶǀĞŶƚŝŽŶĂů ŵĞĐŚĂŶŝƐŵ ĨŽƌ ƌĞǀĞƌƐŝďůĞ E ͲĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶ ŽĨ ƉƌŽƚĞŝŶƐ ŝƐ ĞŶnjLJŵĞͲĐĂƚĂůLJnjĞĚ ĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶ ĂŶĚ ĚĞĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶ͕ ǁŚŝĐŚƌĞůŝĞƐ ŽŶ ůLJƐŝŶĞ ĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞƐ;ĞǀĞůƐŽĨĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶǁĞƌĞĚĞƚĞĐƚĞĚďLJǁĞƐƚĞƌŶ ďůŽƚĂƐƐĂLJƵƐŝŶŐĂŶĂŶƚŝͲĐ Ăƚ ϯϳ° ĨŽƌ ϭ͘ϱ Ś͕ ĨŽůůŽǁĞĚ ďLJ ĂŶ ĂŶĂůLJƐŝƐ ƵƐŝŶŐ ^^ͲW'͘ >ĞǀĞůƐ ŽĨ ^ǀĞĐƐ ĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶ ǁĞƌĞ ĚĞƚĞĐƚĞĚ ďLJ ǁĞƐƚĞƌŶ ďůŽƚƚŝŶŐ ƵƐŝŶŐ Ă ƐƉĞĐŝĨŝĐ ĂŶƚŝͲĐĞǀĞůƐ ŽĨ ^ǀĞĐƐ ĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶ ǁĞƌĞ ŵĞĂƐƵƌĞĚ ƵƐŝŶŐ Ă ǁĞƐƚĞƌŶ ďůŽƚ ĂƐƐĂLJ͘ sĂƌLJŝŶŐ ĐŽŶĐĞŶƚƌĂƚŝŽŶƐ ŽĨ ƐŶ͕ ŝŶ ƚŚĞ ƌĂŶŐĞŽĨϬʅDͲϱŵD͕ǁĞƌĞĂĚĚĞĚƚŽĂƐŽůƵƚŝŽŶĐŽŶƚĂŝŶŝŶŐ^ǀĞĐƐ;ϮʅDͿ͕^ǀĞWĂƚ;Ϭ͘ϯʅDͿ͕ĂŶĚ ĐͲŽ;ϲϬʅDͿ͕ ĨŽůůŽǁĞĚ ďLJ ŝŶĐƵďĂƚŝŽŶ ĨŽƌϭ͘ϱ Ś Ăƚ ϯϳ°͘ ;Ϳ͘ dŝŵĞͲĚĞƉĞŶĚĞŶƚ ŝŶĂĐƚŝǀĂƚŝŽŶ ŽĨ ^ǀĞĐƐ ďLJ ĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶ͘ dŚĞ ĂĐƚŝǀŝƚLJ ŽĨ ^ǀĞĐƐ ǁĂƐ ŵĞĂƐƵƌĞĚ Ăƚ ĚŝĨĨĞƌĞŶƚ ƚŝŵĞ ŝŶƚĞƌǀĂůƐ ĚƵƌŝŶŐ ŝŶĐƵďĂƚŝŽŶǁŝƚŚ^ǀĞWĂƚ͘භϱʅD^ǀĞĐƐ͖ŶϱʅD^ǀĞĐƐĂŶĚϬ͘ϮʅD^ǀĞWĂƚ͖ŸϱʅD^ǀĞĐƐ͕ Ϭ͘ϮʅD^ǀĞWĂƚ͕ĂŶĚϲϬʅDĐͲŽźϱʅD^ǀĞĐƐ͕ϲϬʅDĐͲŽ͕Ϭ͘ϮʅD^ǀĞWĂƚĂŶĚϮŵD ƐŶ͘ĂĐŚĚĂƚĂƉŽŝŶƚŝŶĚŝĐĂƚĞƐƚŚĞĂǀĞƌĂŐĞĨƌŽŵƚŚƌĞĞŝŶĚĞƉĞŶĚĞŶƚĂƐƐĂLJƐ͘ĂƚĂĂƌĞƌĞƉƌĞƐĞŶƚĞĚ ĂƐŵĞĂŶц^D͕ŶсϯĞdžƉĞƌŝŵĞŶƚƐ͖ƚŚĞƐŝŐŶŝĨŝĐĂŶĐĞůĞǀĞůǁĂƐƐĞƚĂƚWфϬ͘Ϭϱ͘ &ŝŐƵƌĞ ϳ͘ dŚĞ ďŝŶĚŝŶŐ ŽĨ ƐŶ ǁŝƚŚ ^ǀĞWĂƚ͘ ;Ϳ ^ĞĐŽŶĚĂƌLJ ƐƚƌƵĐƚƵƌĞ ;ĚŽƚƚĞĚ ůŝŶĞͿ ĂŶĚ ĐŽŶĨŽƌŵĂƚŝŽŶĂůĐŚĂŶŐĞŽĨ^ǀĞWĂƚ͕ĂĨƚĞƌƚŚĞĂĚĚŝƚŝŽŶŽĨϮŵDƐŶ;ĨƵůůůŝŶĞͿĂŶĚƐƵďƚƌĂĐƚŝŽŶŽĨ ďƵĨĨĞƌ ďĂƐĞůŝŶĞ͕ ĂƌĞ ƐŚŽǁŶ ĨƌŽŵ ϭϵϬ Ŷŵ ƚŽ ϮϲϬ Ŷŵ͘ ;Ϳ dŚĞ ĚŽĐŬŝŶŐ ƌĞƐƵůƚ ŽĨ ƐŶ ƚŽ ^ǀĞWĂƚ ƐŚŽǁƐ ƚŚĂƚ ƚŚĞ ƉŽƐƐŝďůĞ ƌĞƐŝĚƵĞƐ ŽĨ ^ǀĞWĂƚ ŝŶƚĞƌĂĐƚ ǁŝƚŚ ƐŶ ǀŝĂ ŚLJĚƌŽŐĞŶ ďŽŶĚƐ͘ ;͕ Ϳ dŚĞ ĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞĂĐƚŝǀŝƚŝĞƐŽĨ^ǀĞWĂƚŵƵƚĂŶƚƐ;͕͘ ^ĂŚƵ ͕͘ ^ŽƌĞŶƐĞŶ ͕͘ DŝŶĂƐŽǀ '͕͘ >ŝŵĂ ͘W͕͘ ^ĐŚŽůůĞ D͕͘ DƌŬƐŝĐŚ D͕͘ ŶĚĞƌƐŽŶ t͘&͕͘ 'ŝďƐŽŶ ͘t͕͘ ^ĐŚŝůůŝŶŐ ͕͘ tŽůĨĞ ͘:͘ ;ϮϬϭϰͿ ^ƚƌƵĐƚƵƌĂů͕ ŬŝŶĞƚŝĐ ĂŶĚ ƉƌŽƚĞŽŵŝĐ ĐŚĂƌĂĐƚĞƌŝnjĂƚŝŽŶ ŽĨ ĂĐĞƚLJů ƉŚŽƐƉŚĂƚĞͲĚĞƉĞŶĚĞŶƚ ďĂĐƚĞƌŝĂů ƉƌŽƚĞŝŶ ĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶ͘W>Ž^KEϵ͗Ğϵϰϴϭϲ͘ ϱ͘ 'ƌƵŶĚLJ &͘:͕͘ dƵƌŝŶƐŬLJ ͘:͕͘ ,ĞŶŬŝŶ d͘D͘ ;ϭϵϵϰͿ ĂƚĂďŽůŝƚĞ ƌĞŐƵůĂƚŝŽŶ ŽĨ ĂĐŝůůƵƐ ƐƵďƚŝůŝƐ ĂĐĞƚĂƚĞĂŶĚĂĐĞƚŽŝŶƵƚŝůŝnjĂƚŝŽŶŐĞŶĞƐďLJĐƉ͘:͘ĂĐƚĞƌŝŽů͘ϭϳϲ͗ϰϱϮϳͲϰϱϯϯ͘ ϲ͘ ĂƐƚĂŹŽͲĞƌĞnjŽ^͕͘ĞƌŶĂůs͕͘ůĂŶĐŽͲĂƚĂůĄ:͕͘/ďŽƌƌĂ:͘>͕͘ĄŶŽǀĂƐD͘;ϮϬϭϭͿĐDWͲZWĐŽͲ ŽƌĚŝŶĂƚĞƐ ƚŚĞ ĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶ ŽĨ ƚŚĞ ƉƌŽƚĞŝŶ ĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶ ƉĂƚŚǁĂLJ ǁŝƚŚ ĐĞŶƚƌĂů ŵĞƚĂďŽůŝƐŵ ŝŶ ƐĐŚĞƌŝĐŚŝĂĐŽůŝ͘DŽů͘DŝĐƌŽďŝŽů͘ϴϮ͗ϭϭϭϬͲϭϭϮϴ͘ ϳ͘ ĂƐƚĂŹŽͲĞƌĞnjŽ^͕͘ĞƌŶĂůs͕͘WŽƐƚ,͕͘&ƵŚƌĞƌd͕͘ĂƉƉĂĚŽŶĂ^͕͘^ĄŶĐŚĞnjͲşĂnjE͕͘͘^ĂƵĞƌh͕͘ ,ĞĐŬ ͘:͕͘ ůƚĞůĂĂƌ ͘&͕͘ ĄŶŽǀĂƐ D͘ ;ϮϬϭϰͿ WƌŽƚĞŝŶ ĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶ ĂĨĨĞĐƚƐ ĂĐĞƚĂƚĞ ŵĞƚĂďŽůŝƐŵ͕ ŵŽƚŝůŝƚLJĂŶĚĂĐŝĚƐƚƌĞƐƐƌĞƐƉŽŶƐĞŝŶƐĐŚĞƌŝĐŚŝĂĐŽůŝ͘DŽů^LJƐƚŝŽů͘ϭϬ͗ϳϲϮ͘ ϴ͘ >ŝĂŶŐt͕͘ĞƵƚƐĐŚĞƌD͘W͘;ϮϬϭϮͿWŽƐƚͲƚƌĂŶƐůĂƚŝŽŶĂůŵŽĚŝĨŝĐĂƚŝŽŶŽĨZEĂƐĞZŝƐƌĞŐƵůĂƚĞĚďLJ ƐƚƌĞƐƐͲĚĞƉĞŶĚĞŶƚƌĞĚƵĐƚŝŽŶŝŶƚŚĞĂĐĞƚLJůĂƚŝŶŐĞŶnjLJŵĞWŬĂ;zĨŝYͿ͘ZE͘ϭϴ͗ϯϳͲϰϭ͘ ϵ͘ ^ĐŚŝůůŝŶŐ͕͘ŚƌŝƐƚĞŶƐĞŶ͕͘ĂǀŝƐZ͕͘^ĂŚƵ͘͘/͕͘tĂůŬĞƌͲWĞĚĚĂŬŽƚůĂ͕͘^ŽƌĞŶƐĞŶ͘:͕͘ ĞŵĂŝƚĂŝƚŝƐ ͕͘ 'ŝďƐŽŶ ͘t͕͘ tŽůĨĞ ͘:͘ ;ϮϬϭϱͿ WƌŽƚĞŝŶ ĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶ ĚLJŶĂŵŝĐƐ ŝŶ ƌĞƐƉŽŶƐĞ ƚŽ ĐĂƌďŽŶŽǀĞƌĨůŽǁŝŶƐĐŚĞƌŝĐŚŝĂĐŽůŝ͘DŽů͘DŝĐƌŽďŝŽů͘ϵϴ͗ϴϰϳͲϴϲϯ͘ ϭϬ͘ ,ĞŶƚĐŚĞů͕͘dŚĂŽ^͕͘/ŶƚŝůĞW͘:͕͘ƐĐĂůĂŶƚĞͲ^ĞŵĞƌĞŶĂ:͘͘;ϮϬϭϱͿĞĐŝƉŚĞƌŝŶŐƚŚĞƌĞŐƵůĂƚŽƌLJ ĐŝƌĐƵŝƚƌLJƚŚĂƚĐŽŶƚƌŽůƐƌĞǀĞƌƐŝďůĞůLJƐŝŶĞĂĐĞƚLJůĂƚŝŽŶŝŶ^ĂůŵŽŶĞůůĂĞŶƚĞƌŝĐĂ͘DŝŽϲ͗ĞϬϬϴϵϭͲϭϱ͘ ϭϭ͘ EĂŵďŝ^͕͘'ƵƉƚĂĞŶŐW͘Y͕͘zĞ͘͘;ϮϬϭϰͿůůŽƐƚĞƌŝĐƌĞŐƵůĂƚŝŽŶŽĨĂƉƌŽƚĞŝŶĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞŝŶ



DŝĐƌŽŵŽŶŽƐƉŽƌĂ ĂƵƌĂŶƚŝĂĐĂ ďLJ ƚŚĞ ĂŵŝŶŽ ĂĐŝĚƐ ĐLJƐƚĞŝŶĞ ĂŶĚ ĂƌŐŝŶŝŶĞ͘ :͘ ŝŽů͘ ŚĞŵ͘ Ϯϴϵ͗ϮϳϬϯϰͲϮϳϬϰϱ͘ ϭϯ͘ ĞƌŶĚƐĞŶ ͕͘͘ ĞŶƵ :͘D͘ ;ϮϬϬϱͿ ƐƐĂLJƐ ĨŽƌ ŵĞĐŚĂŶŝƐƚŝĐ ŝŶǀĞƐƚŝŐĂƚŝŽŶƐ ŽĨ ƉƌŽƚĞŝŶͬŚŝƐƚŽŶĞ ĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞƐ͘DĞƚŚŽĚƐ͘ϯϲ͗ϯϮϭͲϯϯϭ͘ ϭϰ͘ ͕͘ yƵ d͕͘ Ăŝ ͕͘ ,Ğ ͘ ;ϮϬϭϰͿDŶϮнͬDŐϮнͲĚĞƉĞŶĚĞŶƚ ƉLJƌƵǀĂƚĞ ŬŝŶĂƐĞ ĨƌŽŵ Ă ͲůĂĐƚŝĐ ĂĐŝĚͲƉƌŽĚƵĐŝŶŐ ďĂĐƚĞƌŝƵŵ ^ƉŽƌŽůĂĐƚŽďĂĐŝůůƵƐ ŝŶƵůŝŶƵƐ͗ ĐŚĂƌĂĐƚĞƌŝnjĂƚŝŽŶ ŽĨ Ă ŶŽǀĞů DŶϮнͲ ŵĞĚŝĂƚĞĚĂůůŽƐƚĞƌŝĐĂůůLJƌĞŐƵůĂƚĞĚĞŶnjLJŵĞ͘ƉƉů͘DŝĐƌŽďŝŽů͘ŝŽƚĞĐŚŶŽů͘ϵϴ͗ϭϱϴϯͲϭϱϵϯ͘ Ϯϰ͘ ĞŶŶĞƚƚ ͕͘͘ ŝƵ y͘y͕͘ >ŝƵ t͕͘͘ zĞ ͘͘ ;ϮϬϭϲͿ ZĞŐƵůĂƚŝŽŶ ŽĨ Ă ƉƌŽƚĞŝŶ ĂĐĞƚLJůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞ ŝŶ DLJdžŽĐŽĐĐƵƐ džĂŶƚŚƵƐďLJƚŚĞĐŽĞŶnjLJŵĞEW͘:͘ĂĐƚĞƌŝŽů͘ϭϵϴ͗ϲϮϯͲϯϮ͘