MODEL DRIVEN QUANTIFICATION OF INDIVIDUAL ... - TIMC-IMAG

           
 

!""$$ \_``$ 

 ‚ ƒ 
„
 $` † $ \ ‡ˆ‰  \ ‡Š" \ ‚‰ ‹ ‚Œ $‰ \
‰\ „‘“”•  _ \– — ! ‰`" Š"$   !!˜ ™‰ \ ˆ \  ‘”š „!š!‘˜\–— 

$_ Š `\› —_$ ƒ 
„
 $` † $ \ ‡ˆ‰  \ ‡Š" \ ‚‰ ‹‚Œ ‘“”•  _\–—"›_``—$œ"ˆ—Š

‚  _ _  Š  "ˆ ƒ† ƒ_" \ ƒ`_† Š  ˆ† \$"\  ` $Š Š  "ˆ `"  \ŠŠ –`" –$ƒ—\\_`_"ˆ`"ƒ™$\Š" \ ƒ\ _  _  ``$ ™   _ \™\$  ™— žŸ™ _ ˆŸ_Ÿ__ƒ__ Š"ˆ$™"$— † _  Ÿ__ – ƒ_ $ Š \ $\ ƒ ˆ\ Ÿ_  $Š\ \`Š"ˆƒ†\ˆ_"†Š_\_ _†š!•— ˆ "„` ™\„"`† \ \ † Š \ˆ "ˆ "  Ÿ $Š\  _†š!• \" "† ŠŠ "ˆ `\ \ ¡† ` "Ÿ\ŠŠ"ˆ†›_™Ÿ$\_ˆ†\_„``$\ ˆ\`†—\†_ˆ"ƒŸ\`\$ŠŠ  "† ƒ\ _  \™\$  †   ``$ \†" †  _ "$„ˆ $ "\ Ÿ \™`\ \ \$\   `ƒ _ Š"Ÿ¢ ƒ  $Š† _ "$„ \—
\ "$ `† ™ _ ` ƒ \$\ ƒ†  `Š \ „ \_ Ÿ_  "ˆ `""\Š"_–™†$\™Ÿ$\_ˆ†—

£†Ÿ\›\"Ÿ¢"\"$„ˆ"\Ÿ$\_ˆ†"$„ $Šˆ\`"ˆ†—

—  


ˆ Š """ $  `†  "`   Š$\" `_†„`_ˆ`$\ˆŸ$\`\ˆˆ‹
et al. !”””¤ $ŠŠƒ$ˆ \ ŠŠ_ !””¤ ˆƒ !””!Œ—  _ – _ " ƒ_™$ Š \_    ¢† Š Š _ \™`" Š _ ` Ÿ¢ _ $ \$ˆ ™$ "\ˆ Š ¡$†  Ÿ_ $"$ ™$¢`‹\Šet al.!””Œ— Acta Biotheoretica 52: 343–363, 2004. c
2004 Kluwer Academic Publishers. Printed in the Netherlands.

¥¥

‚ET AL.

ˆ "ˆ † ¢ †\ _"ƒ ‹†\ š•!Œ ˆ™  Š"_`„"`™$Š_"†™!$ƒ— _$$ŠŠ_"ƒ_™$Š"†"„`™\„ "`†Ÿ_____\`\$_$ˆ"$Š$ˆ_\‹‚\  šššŒ— $† _ $Š Š _ " ƒ_™$ Š    †  _ _ Š ™ –`" "\ ƒ$  †  _ † Š _ „ƒ\ \ ƒ† ™ "_" "\ ‹
__Ÿ \ $ŠŠƒ$ˆ šš‘Œ—  _ –`" \ _ in vitro Ÿ$\ _ˆ ‹žŒ †–™†$\Š__ \_$ŠŠ™ "†—_†Š$"†ˆ†Ÿ$\\ƒ†`` ` Ÿ_   \" _ Ÿ$\ ˆ"†—
 † _ „``$\ ˆ\`‹ Œ†_ƒ$\–`""\Š_ ˆ _ "† Š   ™$ –$ $ƒ ‹$ et al. šššŒ—  _ ††``\Ÿ_ˆ\`\_\ŠŠ$`ˆ™† $ Š _ \`  _ $$\ˆ –$ $ƒ— †  _ ž † Ÿ_ _ Ÿ$\   \" `ƒ Š$ Š _ `` Ÿ$\ "ˆ _   †  ƒ ™Ÿ\   ` Ÿ$\—  ƒ_ † \ †  ƒ $\¢ _  _  ``$ ™  ƒ† ˆ_ˆ Š" ƒ\  _ \™\$  ™—  _ ž † ``  "†ƒˆƒ†$Š\Š"_\Ÿ_"Š_Ÿ$\\ Ÿ_  _   †  "†  ˆƒ† _ \ ƒ† _ Ÿ™„¢ ``ˆŠ_"ˆˆŠŠ"™ˆ$\_\`—$ŠŠ "†Š"\™\$¡ˆ™"`Š"ƒ$  _ ` Š  ˆ ™ƒ†— \\  ``  "™ ˆ Š†  `_™_"™ƒ$ŠŸ"\"†\\™ ˆ " ™—  ¡  _ ƒ †\  _ Š"Ÿ¢ Š ` \" Ÿ¢ "\ ‹
 et al. šš!Œ Ÿ__ \ "  ™† \ ` "  Ÿ ƒ `_"ˆ `" Š _ _ Š"†— _``"`ƒŸ"†$Šƒ\Š"_ ˆƒ\_"ˆ†$\¢Š_`"\_    _†š!• ‹\ˆ et al. š‘¤ $ et al. !””Œ \™\ Š" _$" $"ƒ ™ \_  ‹ž Œ—  ž  _   ƒ  Š" `†„¢$$Ÿ_$$\–$"¢"ˆŠƒ ˆ‹ _‰et al.šš“¤$\$!”””Œ\_$Š` Š_$\†ŠˆˆŸ$\_ˆ—_Š`Š_$ _ "ˆ Š  _†š!•   $Š\  ƒ_ ž \   †— žŸ™Ÿ`Š"_–`"$_`ƒ$\ ˆ™   \ŠŠ $ ƒŸ _ ˆƒ \ _  ``_— \\in vitro $\ Š `_ "† Ÿ$\ _Ÿ\ _ Ÿ$\ $   † _™\ƒ†_"Š_Ÿ$\"ˆƒ$™™_\†" Š_Š$Š™ŸŠƒ_\_"ˆ‹£`et al.!””Œ—
™ _``ŠŸ$\\$™™Š_`$_  `Š „ \_  "ˆ \$ ƒ† ƒ_" ˆˆ `_Ÿ†‹†et al.!”””Œ—  _ \ ` Š _ $   _ ``_ ƒ\  _ Š"$ Š  "$„ˆ $ "\  \™`\  \  \\ _

     
 

¥˜

_`ƒŸ\``"†\Š\_ˆ\ ƒ_™$$ˆŠ"\\™"$\_„\†" —  _ "\ _   \\   ˆ _ \ ƒ†  $$ \ \†" ``— $_" _ „ˆ  _$ˆ_ƒ„\ˆˆ`Ÿ_™"$\ˆ_— ‚"$ Š _ "$„ˆ "\ _™ ƒ `Š"\ Ÿ_ \ˆ ƒ_ _ `  \$\ ƒ† _ \ŠŠ ˆ" Š _ "ˆ † \\ _  Ÿ  \ŠŠ  "† `Š™ \ \_™ ``Š\™\$—_ˆ_Š_"$$Ÿ\$\_ –Ÿ__ˆƒ"Š"†ƒ\\_ˆ Š_\™\$¡¢\_\™\$™—

!—
 ‚ 
ž‚ $$ –`" Ÿ `Š"\ $ˆ _ _$" `" \_  _†š!•  — _    \™\ Š" _ Š$ Š ž  Ÿ_ _ ˜¥š _$" $ˆ `_ "   ‹\ˆ et al. š‘Œ—  Ÿ ˆŸ   "` "\$" "`\ Š $ƒ‡
\Š\ ˆ
\$" $``"\ Ÿ_ !„"
 ˆ$" ”¦ _„™\ Š Š $" ‹™ˆ Š _ˆŒ\`„`"†‹Š„_ˆŒ$$Š¢  “§   _$"\Š\ ! ‹˜¦Œ "`_—  Ÿ $ƒ„$$\ $ˆ †`¨ "–\$\_\_Š"_$$Š¢\_ \\˜”””¨"!"`"\$"—

In vitroŸ$\_ˆ‹žŒ† _ž†Ÿ\$`™$†\ƒ\‹et al.!”””Œ— Ÿ $$\ $ Š$ ‹”˜¨"!Œ  ˆ $$ _"ƒ ‹ƒ_

$Œ—"†Ÿˆ†_\Ÿ_```ˆˆ$ Ÿ$\ ƒŸ !”” \ ˜”” µ " Ÿ\_ \ –™† \ Ÿ_ ‚ Ÿ_$ $" \ "ˆ$" ‹Š _ˆŒ  "™  $ \ƒ— _ "` "\$" Ÿ _ \\\— _ $ƒ$   Š _ \$\\ $Š Ÿ $Š\ ƒ† "„` ™\„"`† ™ !¥  ¥‘ _$ ‹ ƒŸŒ—

``$\ˆ\`‹ Œ† _  "ˆ † Ÿ \™\ Š" _ "_\ \ƒ\ ƒ†  \ \‹š“‘Œ\\`\Š"£\Š_„‹ššŒ— _†š!• Ÿ $`\\  !”–”•¨"  "` "\$" $``"\ Ÿ_ ”—¦ ˆ \ "\  “§  `™ ˆˆ Š _ ˆ— ` Š ! µ  ™$"Ÿ¢Š"_$$`\`\_ŠŠƒˆ `™$†``\$$\_‹ƒŸŒ—_``Ÿ`\ ¥§Š˜"$Ÿ_ˆ$ˆ—_”—˜¦ŠŠ$" $"‹™ˆŠ_ˆŒ$``"\"\$"Ÿ\\\™_

¥•

‚ET AL.

\`—"ˆŸ_\\ƒ†\ˆ"„`™\„"`†\$ˆ !¥¥‘_$—

`ŠŠƒˆ \  ˜"" \" $$  \_ "" _¢ ˆ Ÿ ``\ Š"  ‚ ƒ$ŠŠ ‹Š _ˆŒ Š Š $" \ "ˆ$" \ ˆ Šƒˆ ‹"ˆ¨" ‚ˆ"„ \_Œ _"ƒ ‹”—¥ ¨" ‚ˆ"„

\_Œ\`‹˜ µ ˆ¨"_ˆŒ`"_ƒ—Ÿ _$ƒ\™ˆ_“§_$"\Š\"`_—

`Š† Ÿ\\˜”””¨"!"`"\$"\˜""\" $$ \_ \ $ƒ\  “§   _$"\Š\ \ !  ˆ$\ ‹˜¦Œ "`_—_™$Š\†Ÿ_"ŸŠŸ\™™\†ƒ† $ˆ$™"™—$$Ÿˆ†\$\_ $ƒ\ Ÿ_ †`¨  "–\ $ $  \_\—  \† Ÿ \"\"$†Ÿ_
 $ˆ_"†"—

"„`™\„"`† _–`"$$\_Ÿ_"ˆˆŸ`\_ˆ Š© –™˜
™\"`$``\Ÿ__ _ˆ" ˜–  –” ƒ¡™  "`$ \ !  \ _"ƒ ‹“§ !  ˜¦ _$"\ "`_Œ ‹
 $ƒ „©Œ $"\ _$ ‹ ƒ Œ \   " ‹‚

 ` ‚ŠŒ "\ ™  "`$ ƒ†  "ˆ $ \ † ŠŸ ‹
 $ ` ‚ŠŒ— _ "` ƒŸ`Š"\$ˆ""\‹‚‚„!Œ—‚ˆˆx \y–Ÿ_–˜ƒ¡™Ÿ`™†Š”—‘ µ "¨`–\”—š”š µ "¨`–—  ƒ™ ˆŠ  "™" \$ˆ _ " $ Š _ –`" ™\„"`† "ˆ Ÿ $$† \\ Š !¥  ¥‘ _$ Ÿ_  "`ˆ`\Š_Šž†\”—˜_Š †—

"ˆ†_``$™ _
 $ ŠŸ ‹` ‚ŠŒ Ÿ $\ Š _ "ˆ † Š ™\„"`†$\\Š_†—_ž†_Ÿ$\\ $Š A‹tnŒ_"™tnŸƒ\ƒ†"ˆˆ"—_" Ÿ$\ $ ™† V‹tnŒ  _ \ ``\$  _  Ÿ$\ "ˆ‹ˆ$ŒŸŠ\Š"„$ˆ``\Ÿ_\ˆ Ÿ\Ÿ"$\ˆk–`"`A‹tiŒ\ˆ__`›

     
 

k. −V (tn ) =

¥“

∑ (t . A(t )) - ∑ (t )∑ ( A(t )) i

i

i

i

i

i

 H.  k.  

i





∑ (t ) -  ∑ (t )  2 i

i

i

i

2

,

i = n-

(k - 1) (k - 1) , ......, n + 2 2

  

Ÿ_H__ˆ_Š_Ÿ$\\—¢\ˆŸ\ŸŸ\_ ˆ™ ƒ† kª˜—  _   † _ ˆ" `\$ ˆ™  _ " ™_$ŠŠ_!\"–\ˆŠ"_ˆ\`ƒ$\†$` _ $ˆ_† $  \Šˆ _ "ˆ Š \"\ ƒ† _ \ˆ "ˆˆ—_"™†Š_``$V‹tnŒˆ``–"\ ƒ†ˆ™_–`"`—

‚\™Ÿ

`™Ÿ

Figure 1— ‚_" ™Ÿ \ ™\„"`† `_  "ˆ Š _ Ÿ  "ˆ†— ›_in vitroŸ$\_ˆ‹žŒ†Š$"† Ÿ$\\—›_„``$\ˆ\`‹ Œ††Š\Ÿ_ ˆ\``\Š"\"™\Š$ˆ†_$\†ˆŠƒˆ—

"ˆ†_\™\$™ ƒ_†`Š"ˆ†\™\$`_Š”Ÿ¢\"„ $"† Ÿ_ _ "ˆ † ŠŸ ¢"ˆ‹
$$Œ—

_"tnªn— ∆ tŸ_ ∆ t_"`ˆ"™_`Š_  \ «x‹tnŒy‹tnŒ¬ Ÿ \\—  $™ _  Š _  "ˆ_Š\Š"_\ƒ†\ˆ_\™\$¡†   ` \" Ÿ¢—  _ "\ˆ ``_ _ $\ \`" d.d‹tni ∆ tŒ Š _   "`$\ ™  " `\ ­i— ∆ t® Š" _ \ ƒŸ_$™`«x‹tnŒy‹tnŒ¬\«x‹tn¯i ∆ tŒy‹tn¯i ∆ tŒ¬› d—d‹tni ∆ tŒª­‹x‹tn¯i ∆ tŒ²x‹tnŒŒ!¯‹y‹tn¯i ∆ Œ²y‹tnŒŒ!®— ‹Œ

¥‘

‚ET AL.

_ _ "„$\ \`" ³d—d‹tkŒ´ Š  ˆ™ " tkªk— ∆ t  ƒ\ƒ†™ˆˆ_\"`$\Š"™``ˆ™ŠŸ\_ k "™ˆ ™   ` Š" _  " t” $`  _ Š ƒ™ "tendªN— ∆ t— ``Š_™`\$ˆ™›

< d.d (tk ) > =

1 ( N − k + 1)

N −k

∑ d.d (t , k∆t) — i

‹!Œ

i =0

$\\`"ˆ™"Ÿ†Šk³Nƒ†› σ d2 .d (tk ) =

1 ( N − k)

N −k

∑ [d.d (ti , k∆t)− < d.d (t i =0

k

]

2

)> —

‹Œ

ŠŠ _ ``_ _™ _Ÿ _ _ " $\ \`" ³d—d ´™"tŠ"™ˆ`™"ƒ_ \ ƒ† † Ÿ `"  `\ V \ ` " P \ˆ  _ †–`‹
et al.šš!Œ› ³d—d‹tŒ´ª!—V!—P—­t²P—‹²–`‹„t¨PŒŒ®— ‹¥Œ \  _ _`  „  $ Šˆ `\$ _ ƒ $\\Š†Š"_¡†`"‹ViPiŒ—  $ "¢ _  ™† _ " ™ _  \ "  _ $—
™_™``ˆ`\$™ˆˆ$\ƒ_ˆ_†ƒ\ ƒ†$ŠŠ$"ƒŠ™Š_Ÿ\_kˆ—_$"$\ \`""`$\Š"™_tminª¥—dtˆ_tdªtend¨! Ÿ$\\_Šˆ`\$—™\_ƒ\$\ƒ†_"`ˆ ™ $\ Š "ˆ $  Ÿ  _ ƒ \$\ ƒ† " "" Ÿ_\Š\`"P__\ˆ_tend¨Ÿ –$\\Š"Š$_†—™$_ˆŠƒŸ$‚$\ „Ÿ`Š"\Ÿ_ˆŠ™p³”—”˜—

—‚ ‚ \™\$¢ˆ _ „\ Ÿ\  ` Ÿ $\  ˆ_ _ \™\$  ¡\\ƒ†™\„"`†ƒ_"ˆ†‹ˆ$!Œ—_ \ˆ"ƒ\ƒ†ˆ¡$_Ÿ†__ ` \ Ÿ_ _ – ˆ— _ \ˆ"  ˆ$! _Ÿ _  ŠŸ\¡—_ž†‹ˆ$! Œ"™Š"_Ÿ$\ "ˆ Ÿ\ _  Š _ \$\\  —— Š" Š  ˆ_ ‹`™ x ƒ™$ŒŠ"ˆ_Š‹ˆ™xƒ™$Œ—_ † ‹ˆ$!Œƒ™–`\Š$ˆ"Š_™_Šƒ ˆŸ†Š"_$``Šˆ$`\ƒ†_ˆ\`‹ˆ$Œ— ˆƒ†\_$™`Š\™\$"ˆ\ŠŠ _ Ÿ `_"ˆ `"  `\ V \ ` " P Ÿ $\¢\ƒ\‚!—ˆ$–"`Š_Š$\ŠŠ ¡ ‹Š $" ˆ$Œ  ™† Š† ˆ\ Š Š Ÿ ƒ\ Ÿ__`\"Ÿ¢"\‹ˆ_$"ˆ$Œ—

     
 

¥š

A

150

Y position (µm)

100 50 0

-300

-200

-100

0

100

200

300

-50 -100 X position (µm) B

50 0 Y position (µm)

-100

-50

0

50

100

150

200

250

-50 -100 -150 -200 -250 X position (µm)

Figure 2— \™\$  ¡ ¢\  ƒ_ "ˆ †— › ¡ Š •"`\Š"_ž†— –`\Š"_ˆ_Ÿ$\"ˆ "ˆ Ÿ\ _ Ÿ$\  Ÿ_  ˆŠ $"ƒ Š ¡ Ÿ__   ``\$_Ÿ$\"ˆ—™†Š"_ŠŸ$\"ˆ"™_ ˆ_—›¡Šˆ_"™ˆŠ"_ˆ\` †—_\` \_$``Š`Š_ˆ`_— ¡_™ƒ\$__ _`Š_\Ÿ__ˆŠ_ˆ`_—

˜”

‚ET AL.


™$Š`\\`"\Š\Š"Š¥¥ ¡  $"" \  ƒ—  `\ \ ` "   _ \Š˜ µ "¨_\!—˜_$`™†_ž†Ÿ_„ˆŠ \ŠŠƒŸ__ž–`"—‚"™$ƒ\Ÿ__  †—_$\_Ÿ™__"†`\\ŠŠ –`" \›   † Ÿ \$\ Ÿ_ Ÿ Š Š $"  ‹”—˜¦ ‚Œ  `™ Šƒ ˆ `† Ÿ_ ž –`" Ÿ `Š"\ Ÿ_ ”¦ ‚ ‹ ‚!Œ—  _ Ÿ\  "ˆ \ \_   \Š"ƒ –$ "– ‹ Œ "  $ƒ _ \Š"†\$\ƒ†Ÿ‚— ³d—d´‹ µ "!Œ

90 Y position (pixels)

6,00E+04

80

5,00E+04 4,00E+04

70

3,00E+04

60

2,00E+04 1,00E+04

50 500

600 700 X position (pixels)

800

0,00E+00 0

450

2,50E+04

430

2,00E+04

410

1,50E+04

390

1,00E+04

370

5,00E+03

350

2

4

6

8

10

12

0,00E+00

250

300

350

400

450

0

5

10

15

20

0

5

10

15

20

6,00E+04

510

5,00E+04

490

4,00E+04

470 3,00E+04

450 2,00E+04

430

1,00E+04

410

0,00E+00

410

510

610

710

Figure 3—\ŠŠ"ˆ†`"$"ˆ__ŠŸ` \" Ÿ¢ –"`Š\ ƒ† _ †`  ¡ ‹Š ` Š _ Šˆ$Œ— _ `\ˆ "`$\ " $\ \`"  \\  _ ˆ_ ` Š _ Šˆ$—  _ ˆ`_ _ \  `\  _ ƒ Š  _ \ Š _ † –`ˆ™ƒ†$‹¥Œ— –ƒ_"Š_$"—

     
 

˜

Table 1—
  `\ \ " ` " \"\ Š" _ Š  –`" ¡Š_\\$"ƒŠ"Ÿ_$ˆ`\"Ÿ¢"\ Š  "™"  ž \   "ˆ †—  \ŠŠ$™† ŠŠ Ÿ $\Š"_"™$$ˆ$‹˜Œ—


ˆ„  † ž

 

‚$ƒ

ƒ 

V‹ µ "¨_Œ

P‹_Œ

µ ‹”„•"!¨_Œ

‹µžŒ ‹µž!Œ ‹µžŒ ƒˆ

¥   ‘

˜—˜”¯—”¥ —š¥¯˜—•! ˜—!˜¯—!! ¥—‘•¯—

!—¥¯”—•š !—“!¯”—•¥ !—˜‘¯”—‘˜ !—¥¯”—•

!—š”¯”—‘“ !—•¥¯—”˜ —””¯”—š‘ !—“¯”—“

_¢ƒŸ\™\$"ˆ†ƒ_™$\"ˆ _``$™`™\\ƒ†"`$ˆ_\\""† ŠŠ ‹ $ \ŠŠ$ ŠŠŒ µ  Š" _ V  \ P " ™$ \ˆ__`‹
et al.šš!Œ›

µ =

P.(V ) 2 2

‹˜Œ

Ÿ_ _ Š ! " Š" _ \"† Š _ ! $ƒ— ™  ˆ `\ Š " —— Ÿ_ t´´P _ $ \ŠŠ$ ŠŠ _ _  ™ Ÿ_ " Š _ " $\ \`" Š  ` \" Ÿ¢"Š$‹¥ŒŸ__\!`› ³d—d‹tŒ´ª¥— µ —­t²P®— ‹•Œ \" "† ŠŠ $\  ƒ   † \ŠŠ ƒ\   ‚$\‡ „—  _ ž † _ `\ ™$ Š V \ P  Ÿ\ˆ`™†__`\ƒ†£$™$¢ˆ$et al.‹!”””ŒŠ ƒ™ `$"† † \_  ‹Vª¥” µ "¨_ Pª”—¥_Œ— $ Š" _ ™$_$_$\\""†ŠŠŠ—˜”„•"!¨_ Ÿ___™$`\ƒŠž†—
ˆ†_ _`ˆ™ƒ†$‹•Œ`™\"`Ÿ†_ _™ Š\""†\ŠŠ–$$ƒ‹£$™$¢ˆ$et al. !”””¤et al.!””Œ—$Ÿ\Š$_$ŠŠ"ˆ Š" \™\$  ¡  $™   $Š ƒ\ Š" "$""\_``$™—

$ŠŠ"ˆŠ"ˆƒ``$†

\ˆ  _ `\$ ˆ™  ‚! _ ™$ Ÿ_ " Š _ Ÿ$\\Ÿ\"\ƒ†™"ˆˆ"Š_Ÿ$\"ˆ Š _ "„` ™\„"`† $—   –`" Ÿ$\ $ $ Ÿ_ ”_$ ‹ˆ$ ¥ „¥Œ— $Š Š  "ˆ Š" _ \ Š _ Ÿ$\  A ‹tŒ _ ƒ –`\ Š" $ ‹•Œ ƒ† \ˆ_ŠŸˆ†–`‹Ÿ_t´PŒ›

A(t) = A0 − 4. H µ.(t − P)

‹“Œ

˜!

‚ET AL.

Ÿ_H__ˆ_Š_Ÿ$\‹Hªš¥ µ "Œ— A

B 0,50 0,5

0,4

Wound area (mm2)

Wound area (mm2)

0,40

0,30

0,20

0,10

0,3

0,2

0,1

0,00

0

0

5

10

15

20

Time (h)

25

30

0

5

10

15

20

25

30

Time (h)

Wound closure speed (µm/h)

C 40 35 30 25 20 15 10 5 0 500

400

300

200

100

0

Wound width (µm)

Figure 4—™$Ÿ_"Š_Ÿ$\\_ž†— ›–`" Ÿ$\    _ "  _ _  Ÿ__ "  ˆ™   \ŠŠ Ÿ$\ $¢—›__Ÿ$\Š_ŸŸ$™$`"`\ _ `\ˆ ™$ ¢  _ $`` $™ Š _   _ ¢ Š Ÿ$\$``ƒ™†"—›_Ÿ$\$™"`$\Š"_ `Š_ƒ™$™\ˆŠ†\„Ÿ†Ÿ__Ÿ$\Ÿ\_ ŠƒŸ”” µ "—

 ™† Š† Š  _ –`" \ `\ˆ  "   ™$ Š _ " „$\  _ ƒ ƒ\› _ Ÿ  ƒ \Š Š _ Ÿ `" µ  \ P Š _ ž "ˆ †— _ ™$ `\  ƒ!  $ _ Ÿ_ _ ƒ\ Š" _ Š  \™\$¡—žŸ™_``$``_ˆ™ˆ™$ Š_`""`\_ƒ\ƒ†``†ˆ`\" Ÿ¢"\Š\™\$"™"—

     
 

˜

Table 2—"\\ŠŠ$™†ŠŠ\Š\ˆƒ†Š"_\Š _Ÿ$\Ÿ_"‹ˆ$¥Œ—_"\`\VŠ_Ÿ$\"ˆ_Š _$ŠŸ$\_ˆ\™\Š"_`Š_Ÿ$\$™—

V‹ µ "¨_Œ ” ¥ “


ˆ† ž ž! ž

µ ‹”„•"!¨_Œ

P‹_Œ !—¥ —‘ —”“

!—¥‘ ˜—š‘ •—¥‘

Annular surface around the drop (µm2)

ˆ†™Š_Ÿ$\\_"_ƒ™\ –`" $™ ƒ\ Ÿ_ ž † –_ƒ _ " `Š Ÿ_  Ÿ$\\  ™$  \ ƒ† _   ‹ˆ$¥Œ— _ _ˆ_ˆ_  `ƒ ˆ$ Š _ `\ Š Ÿ$\ $ Ÿ__ `ˆ™† \ $`     ™$ ƒ$ Ÿ_  ˆ \`\  _ Ÿ$\ Ÿ\_ ‹ˆ$¥Œ—  ˆ Ÿ$\ ‹¶¥”” µ " Ÿ\_Œ Ÿ$\ $ `\  $ˆ_† — " _ $„ ™$   "ˆ `\ Š _ Ÿ$\ "ˆ  "\  _Š Š _ ™$ $"ˆ †"" Ÿ$\ $ ‹ƒ!Œ— Š_`_Ÿ$\$`\\$`\†Ÿ_ _Ÿ$\Ÿ\_ŠƒŸ¶”” µ "——ƒ$Š™ˆ_—_$\„ \``_\ˆŠŠ_ˆ$ŠŸ$\$`\— –`_$_ˆ$`¢\_Ÿ$\ˆ"†—— _–ŠŸ``"ˆŠ"ˆˆ—_"_`„ Ÿ$\ ˆ"† ¢  _   † _  "ˆ ™† Ÿ$\ " "—_\\Ÿ_Ÿƒ™\›_ƒ$\\ƒ†_"ˆˆ Š\_ˆ\`ƒ\"†Ÿ_"\`Š —• µ "¨_‹ˆ$˜Œ— 250000

200000

150000

100000

50000

0 0

5

10

15

20

25

Time (h)

Figure 5—™$Ÿ_"Š_ƒ$\\ƒ†_ˆ\`_`\ƒ† _ŠŠ_"ˆˆ_$`—_ƒ\ƒ†ˆ"Š_ "„`™\„"`†"ˆ—

˜¥

‚ET AL.

"` ƒŸ \  ƒ\ $Š Š  "ˆ\``$ƒ\$ŠŠ"ˆ

$"ˆ  †"" Ÿ$\ $ Ÿ "\ _ _ " Š $ T  ž † ƒ† "¢ˆ $ Š $ ‹¥Œ \ \ˆ _ " \\Š_Ÿ$\"ˆ™\L”¨!Ÿ_L”_Ÿ$\  —_ˆ› 2 −T    L0 P ) —  ‹‘Œ = − − T P e . µ . .( 4 1    2      \ˆ_Tˆ__`"P"\™$Š_" T\\ŠŸ$\$Ÿ$\ƒ›

T =P+

(L 0 ) 2 16.µ

‹šŒ

_ `\\ ™$  "`\ \ "`\  ƒ Ÿ_ \ˆ _ \ŠŠ$™† ŠŠ `\ \ ` " \™\   _\ Š" \™\$  ¡ ‹ƒŒ \  _ _ _\ Š"  ``$ †‹ƒ!Œ—ƒ†_"$\\_`\\"\\ŠŸ$\ $$"Ÿ_`\"\Š"ˆƒ``$†— ˆ™$Š_"$\"Ÿ_–`"ž$\ƒ–`\ƒ† _ Š _ _ `\\ " Š $ $" _  "ˆ $ † ˆ\``\$_Ÿ$\"ˆŸ_¡ "\"‹ˆ$! Œ— Table 3—"`ƒŸ_"ŠŸ$\$`\\Š"\™\$ ``_`"‹ƒŒ\ˆƒ``$``_`"‹ƒ!Œ—


ˆ †

\_L” ‹ µ "Œ

ž ž! ž

!˜ ¥”“ ¥•“


$\" ŠŸ$\ $‹_Œ ! !” !¥

\\" TŠ"ˆƒ ``_‹_Œ ‘—! !”—“ !¥—

\\" TŠ" ``_‹_Œ •—” ¥—š ¥‘—”

ŠŠ ƒŸ "$\ \ `\\ " Š Ÿ$\ $ `` ˆŠ† Ÿ_ `\  "\ Š" _ \™\$  ``_— ‚ `\\"_ˆ__Ÿ\_Ÿ\\$Š$_ `Š"†–`$_\ŠŠ‹©_"et al.šš“Œ—\\Ÿ_ _ Š$  "†`Š"†\$ˆ`$Ÿ__ Ÿ$\ _  "ˆ Ÿ\ "`†  Ÿ_ \    Š$ \ \  $\ˆ $_ "_ "$$— _ †  $\¢_–ƒ†\ˆ"$„ˆ"\Ÿ___ ƒ_™   ` " ˆ Ÿ_  Ÿ_ ˆ_ƒ$ˆ  \"_ˆƒ``$ƒ_™$—

     
 

˜˜


ˆ†"$ƒ\"$„ˆ"\

"ˆ_™$"_\$\Š"\ˆƒˆ`"$„ˆ †" ‹
‚Œ  Š `   _† –`†  _ "ˆ Š ™ \†" `  _ \` Š \™\$ ˆ ƒ_™$ ‹
$† \ ƒ¢ !””Œ— Š "`\   $ $" ``_
‚Ÿ"Š\\`Š_ˆ``Ÿ_  ``„\„ _" ‹$_ et al. šš‘Œ— ‚$_  ``_ _ ƒ $\ _   –` " Š †ˆ _Ÿ \™\$  `` \"_™ƒ_™$ƒ™\``$"ˆ †—\\_``_`™\"$„Š"Ÿ¢Ÿ__ˆŠ $™\_ ˆ\™\$ƒ_™$‹"†\™ „\_ ————Œ  ƒ $™† \ $™† "`\  _ \ _ ˆ_"`_ˆ™$Ÿ_"Š_"†`† Ÿ$\$ž†—

A

Btª¥”

Ctª!”

Dtª!””

Figure 6— ‚"$\ "ˆ Š      † Ÿ_$  `Š—

›
`"ˆŠ_ˆ\`\Š_Š$„$ŸŠ"ˆˆ— „›‚"$\\"ˆŠŸ†Š"_ˆˆˆŸ_`_ ¢$™"—_"$\"ˆ†ƒ_™$"`\Šƒ_\" "\\\`"\`$Ÿ_–`""ˆƒ™\ _ †–"`Š\ƒ†"`Šˆ$• \•—

˜•

tª _ A

tª” B

‚ET AL.

tª!_

tª!”

tª¥”

tª‘ _

tªš”

C

D Figure 7— ‚`_ Š _ ™\„"`† $ ƒ\ \$ˆ ž † ‹ Œ \ "$\Ÿ$\$"`$\Ÿ__"$„ˆ"\Ÿ_\ˆ›‹Œ„ \_ \  `Š ‹Œ  „ \_ \  `Š  ‹Œ  \_\`Š—

     
 

˜“

_
‚ _ ƒ \™`\ _   ˆ$ ˆ\  `ˆ  Ÿ„ \" `—  \  \Š\ \ˆ  _ `Š† Š _ "ˆ†——ˆ$ˆ\™\Š_"$Š _ ž † ‹ˆ$“Œ    $ Š   _   † ‹ˆ$•Œ— _Š$Š_„ˆˆ\ˆ"ˆ``Š\ „\Š\ƒ†_ŠŸˆ$—

   ˆƒ  _ "ˆ  `Š \ˆ  _ $"ƒ Š \¡ "`†    ˆ_ƒ$_\— _ $"ƒ Š "`†  \" ƒ_ _ `ƒƒ† Š " \ _ `ƒƒ† Š "ˆ— _ `ƒƒ  \\† "\$\ ƒ†  " Š mf ‹””mf”Œ \  "ˆŠdf‹””df”Œ—_$C\ˆˆ™‹ijŒŠ_ !ˆ\"†ˆŸ\$ˆ_Ÿ__`ƒƒ†› Pm‹ClijŒªmf—ESFij— ‹”Œ _"`†`ŠESFij_Š_$"ƒŠ"`†Ne‹ClijŒ  _ ˆ_ƒ$_\ Š _ \\  ™ _ "–"$" $"ƒ Š "`† Ÿ__ˆ™!`› ESFijªESF‹ClijŒªNe‹ClijŒ¨‘— ‹Œ  \\  _ ƒ™ Š$ „  \ „$ƒ \\ˆƒ†_$ˆ_\_ŠadŸ_””ad”—Š adª \_  "–"$" \ _   "™— † _  Cl "† "ˆ\ˆ_`ƒƒ†› Pd‹ClijŒªdf—‹²adŒ—ESFij— ‹!Œ $ˆ_"†"`_`Š"_$™`› ‹Œ _ –" Š _ ˆ_ƒ$_\ Š  $  \ _ _ ™$Š_`\ˆESFij™$¤ ‹Œ_"`$Š_`ƒ†`Š"ˆ\`\ˆ_ ""ˆ\\_Š¤ ‹Œ _   Š _ Š \†"  ƒ\   _ \ `—Ÿ$"ƒn\n!\"†_\\ˆ_™$ _ClijŸ\™\Šn"_Pm‹ClijŒ\¨"ˆŠn!" _Pd‹ClijŒ— \"ˆ`"`ŠŸŠ_"‹Ÿ_ Ÿ\"™Ÿ\_"\$ˆ__" Œ_\™\$""\†¢$ƒ†__—  –"`  _  Š  " _ E S Fij ™$  "\Š\ \ _ `ƒƒ†Š"ˆ_ˆ\\ˆ†— Migration assays simulations ˆ™\‹\†ˆ"†Š_$ "†Œ_\†"Š_™``$_ƒ"$\Š \ŠŠ™$Š_"†`Š\„\_— ˆ$• _Ÿ _ "$\ Ÿ™„¢ ``ˆ Š _  Š" _  $_ †—_Š$ˆ"ˆ™$`\† _\`\ƒ$Š—_"ˆˆŠ""_ Š`Š$‹\_ŸŒ—

˜‘

‚ET AL.

Figure 8— ›"`$\\™\$¡ˆ™ƒ†_\$\``Š _"$„ˆ"\_"$Šž†—¢\_ ` Ÿ_ `  \ _ Š  —  › \ ™$ Š _ Ÿ$\\  Ÿ_$ \ˆ „ \_ ‹\ Œ  Ÿ_ ¢ˆ  $ „\_‹\\Œ—

_"$\`„"`\†"Š_Ÿ$\$_ž† _Ÿˆ$“„“—_ˆ\Š!Ÿ\•$"`\ˆ Ÿ$\`Š•¥” µ "–!” µ "_„ˆƒˆŠ !” µ "– !” µ "— " ˆ$Ÿ$\Š !Ÿ–‘$" \  _"\\"†_Ÿ$\"ˆ_$\ˆ!‘—   "ˆ Š Š ”— ‹`\ˆ    "ˆ `\ Š !” µ " `"`Œ\\ˆ"`Šƒ†ˆ_"Š ”— Ÿ$\ $   \  š” " $ ‹ˆ$ “ \ “Œ— _ „ \_  \\ Ÿ_ \_ Š   ”—• _ Ÿ$\ $ `` ˆ_†Ÿ"\"‹tª¥”ˆ$“Œ—_`\ˆ"$\ \™\$ ¡ Š "  ¢  _ ˆ_ Ÿ$\ "ˆ  _Ÿ  ˆ$‘ — _ "$\ `_ ¢ _ ˆ" ƒ$  "  _ ` \" Ÿ¢ " Š   –_ƒ\  ˆ$ ! —
™ _ \ \ Ÿ_ " Š _ Ÿ$\  ‹ˆ$ ‘Œ  ™† "  _ –`" ™$ `\  ˆ$ ¥  Ÿ_  `ˆ™ \ Š _ Ÿ$\$`\_\Š__ˆ„¢`— _ƒ™ž†"$Ÿ¢`Š_ƒ\\— \\ Ÿ_$ `Š _ `„"` ™$ Š _ Ÿ$\ $  ™†ˆ$›_Ÿ$\ˆ"†\``\¡$\ƒ$\™_ !ˆ\‹ˆ$“Œ— _"$_Ÿ_"Š_$"ƒƒ\"\ † ‹ˆ$ š Œ— _ "$\ $™ "` ™† Ÿ  _ –`" ˆŸ_ $™ Š  _†š!•  ‹ˆ$ šŒ ƒ\ Ÿ_   $$\  \ƒ\_‚!—_$™–_ƒ†`ˆ"\_`$\ˆ_

     
 

˜š

\ŠŠ ˆ›  † `_ ŠŸ\ ƒ†  –` ˆŸ_ `_ ƒŠ _ˆ`$`_\ˆ`Š_ƒ‹ˆ$šŒ—

Figure 9— ›Š$"ƒƒ†`Šˆ™ƒ†_"$„ˆ"\_ "$ Š  ž †— › –`" ˆŸ_ $™ ƒ\ Ÿ_ _  _†š!•    _ –`" \ ˆ™  ‚!— Ÿ  Š –`" `  ˆ™—_\_\\Š_–`"\ƒ\ƒ†ˆ„¢"\ Š`Š—

¥—‚ ‚‚  _Ÿ¢`™\Š\†Š_"ˆ†``Š_\_ $"$    _†š!•—  $Š Š $_ "ˆ `"  ƒŠ"`\–$"$\\ˆ†"ˆ™Š_  Š $\  –`" † `† _ Š$ˆ  _"– \ $"$™‹ ƒet al.!”””Œ—
™_$™†$\¢ ƒ__\™\$\_``$™_ƒˆ†$\ ƒ Š \$ˆ _ $Š $ Ÿ_  "$„ "$ Š"Ÿ¢Ÿ__ˆ_$™\ƒ\_™—

 _ \™\$  ™ Ÿ Š† ƒ\ _ $Š Š _  _†š!•\""†‹$\ŠŠ$ŒŠŠ_`\" Ÿ¢ "\—  `$ Ÿ \ \  \  " \`\ Š _  "ˆ `_"ˆ `" ‹ˆ" \ ©†ˆ$¢ šššŒ— –`"™$Š""ˆ`\\`"$\ "™$`\_$‹
et al.šš!¤£$™$¢ˆ$et al.!”””Œ— ™__`\"Ÿ¢"\\¢$ „  ¢ „   „ \_— ‚$_  $\ ƒ Š $ "" \ Š $ˆ ™† $ƒ„Š$  "† —— Ÿ \—"Ÿ†_`\"Ÿ¢"\\¢  $  `Š—  ˆ _ \Ÿƒ¢  ƒ "" \ ƒ† \ˆ  ¡ † \$ˆ _ Š _$ Š _ –`" ƒŠ  ˆŠ  Š  $"ƒ Ÿ__ $\ ƒ _ $Š Š  "ˆ— žŸ™ Š _ Ÿ ˆ  \`\ Ÿ_ ŠŸˆ \™\$  ¡ _† `™\  $Š Š  "ˆ Ÿ__  $ Š Š" ƒˆ$Ÿ_Š``$Š¢\_  –`\     Ÿ$\\ — _$  \\  \™\$ 

•”

‚ET AL.

"ˆ † ™ "ˆ†  ƒ_™$ _ ƒ _ \Š" \ \™\ Š" Ÿ$\\  _†š!• $ "†— Š ˆ _ ™Š_Ÿ$\\ƒ†_Ÿ$\\$Š\_`Š_ Ÿ$\ ¢ $™ Ÿ ƒ\ ‹ˆ$¥Œ— $_" _ ˆ _` _ˆ_ˆ_  `` ˆ$ Š _ Ÿ$\ $ `\ Ÿ_ ƒ_ Ÿ$\ "ˆ " —  `ƒ –` Š _ \ $\ ƒ `$\ ƒ† \ˆ___Ÿ$\"ˆ`\$‹‚_™"et al. !””Œ \¨ ` Ÿ†   _" ˆ \ ƒ† Ÿ$\\ — $\ˆ\\\$`Š`_ŸŠƒ†£` et al. ‹!””Œ Ÿ_ `\ _ – Š  ˆ\ $" Ÿ™ Ÿ__  ™_Ÿ$\ˆ`_†ˆ—‚\Š¢_$ "† Š ‹$¢ et al. !””Œ $\  ƒ ™™\  _ ˆ$ `— \\†"_Š\`„–ˆŸ__  Š$  "† $\  "  `†— Š Ÿ$\ˆ "_  – Ÿ$\ _$ $ Ÿ_ ƒ_  "ˆ— _ ƒ$_``Ÿ$\"ˆ"Ÿ\Ÿ_"ƒ Š`Šƒ$_`$Ÿƒ$\Š`Š ˆ$ˆ_—  _ – _ Š"$ Š  "$„ˆ "\  `™\ _  ƒ  ™$ƒ  Š †ˆ $_ "\Š Š  "ˆ ƒ† "ƒˆ _†`_\\Š"ƒ__\™\$\_``$™—\ Ÿ„\"ˆ„"\_`™Š$Š™" ¢_™ƒŠ`Ÿ_ƒƒŸ\ŠŠ\` ˆ ‹_"  _ƒ Š  "ˆ ™$ _"  _ƒ Š  `ŠŒ _ ƒ ™ˆ\—  _ "\ _ Š$ Š _ \ŠŠ ` Š  \†" $ "† _$ˆ_  " Š _ $"ƒŠ"`†–ˆ_ˆ_ƒ$_\— $Š$$"`$Ÿ¢Ÿ$\_Š$Š_–$ $ƒ"`†`$_Ÿ"ˆƒ\ƒ† _  \ ` \ƒ$ Š \_™ ``\ \  ˆ\   $ƒ— \\ " Š $  `\ –`" \ _  "ˆƒ_™$"\Š\Ÿ_\ŠŠ$$"\Ÿ$\›$" `  \ƒ  " $Š \ $ƒ$† ŠŠ  Š$ ¢ \_ \ "ˆ— –`" ƒ† _ et al. ‹!””Œ  \\ _  `Š \  `$™ ™† _ˆ_† \`\  _  "`_ˆ \\ ƒ† `\ $ƒ— ™$ $\ Ÿ_ –$ "– ` $ƒ  ˆ  _™ _Ÿ _ _ "ˆ `\ Š   ˆ$\   ƒ`_"‹
et al. šš¤ ¢et al. šš“Œ— _ ƒ`_ `   ƒ™\ Ÿ_  "ˆ  `\ $Š Ÿ_ \ŠŠ "ˆ" ‹et al. !””Œ— \_  "ˆ  $Š \ Ÿ_  \_ ``\  \ ¸‚  –_ƒ  ˆŠ  Š _ ` Š   \ _$ Š  "† ŠŠ ‹£$™$¢ˆ$et al.!”””Œ—žŸ™Ÿ"$¢`"\_!"ˆ †\\\`Š†`\_`_Ÿ___™  "ˆ ™ –$ "– Ÿ_  "ˆ † \ƒ " † in vivo $ Š "ˆ Š _  †` ¢ Šƒƒ  $¢† ‹  \ \ !””!Œ—  " "` ƒŸ $™

     
 

•

_  Š  "† Š" _ \™\$  ¢ˆ  ™ ƒ_™$$\_ƒ$\¢–"`Š\ƒ†¢et al.‹ššŒ— $_"  $ "ˆ † "\ Ÿ \\  $\  `\ˆ Ÿ__ ``   "` `" Š Ÿ$\ $  _ ƒ Š  `Š ‹† et al. !””¤ \\\„ƒƒ_ et al. !””¥Œ— _ $_  `" _ ƒ \\   $$ "_" "\ Š Ÿ$\ $‹‚™et al.!””¥Œ`\"$„ˆ"\" ˆ†ƒ™ˆ\—_–"`†Š_"\$Š _``"ˆ†``ƒ†"_Š‹\™\$† ‹„ž_ \ ¹ šš¥Œ  "† `$Œ Ÿ$\ $ \ˆ_„ˆ\Š"ƒƒ¡‹$ˆet al.šš‘Œ`ƒ† _Š"Ÿ¢Š`_†„ƒ¡„\"$‹"†et al.!””Œ—

£ 
 ‚ _ $_ ¢Ÿ\ˆ º† ‰"„– Š _  \ —»™Š_\™\ˆˆ_in vitroŸ$\_ˆ–`"— _Ÿ¢Š$\\ƒ†ˆ¼ ‰‰"‰\½Š"__  \__‚Š$‹ ‚Œ—

 ‚

\\\„ƒƒ_‚—‚—™ —$
— —  \ —º‹!””¥Œ—

"Š_™™`Š__†"†‹ $ƒŒ _$"Šƒ"—º$Šˆ†!¥›•”“„•˜—

ƒ — —
_ —   —  —
 — _
— 
— —  
— $ — \ — ‚ \ —
—  ‹!”””Œ— _ƒŠˆˆ\™$$"ˆŸ_ƒ†Š„`\$ˆ› ˆ _`†``_— "º$Š_ˆ†˜•›‘„š— \Š——ž—ˆ‚—ˆ$ —‚`\—\‹!””Œ— ˆ†`! ` _ƒ ™$ \_ ˆŸ_ Š„\$\ "ˆ \  ™ $ƒ Š"Š_$"\_—$_š›¥‘„¥¥“— „ž_º—\ž—¹‹šš¥Œ—_Š†_"ƒ_™Š—›

¢¢ —‹\—Œ—"_Š™"™"\\™Š

 ‚‚— ``‘²!!š—‚`ˆ ˆ— ˆ" —º— \ £— ©†ˆ$¢ ‹šššŒ—
ˆ Š †"`_†  Šƒ„\ $Š›"`™$Š"ˆ†`"—"!”›!!˜„!!!¥— $_ — —† »— \—ƒ†‹šš‘Œ—"ˆ†Š™ Ÿ$\ˆ¡$†Ÿ_"$„ˆ``_— Šˆ™Ÿ !›“²•!— $—— —ž`—
¡—
"\ —ž—
$\‹!””Œ—\_$"™›  ™Ÿ Š _$" ™$ \_   Š ƒ\ ™„\ _—

ˆˆ¥›š„”!— †\ ‚—— ‹š•!Œ— _ _" ŠŠ Š "–$ Š ƒ\† \ ˆ  `†"`_$$¢†—º$Š–`"
\˜›¥˜„¥•”— _ —‚— º——  — $ —
— _\ \ —— ˆƒ ‹!””Œ—  _` `™\ˆƒŠŠ\_"ƒ†—_"\`_†_ ""$”“›˜˜„•— 
 — — º— — $ ‚—
— ƒ\ \ — — $ŠŠƒ$ˆ ‹šš!Œ—
$" Š \™\$"ˆ`"Š_$"$— _º$‘›”š!„”¥—

•!

‚ET AL.


— —º— —‚º— —$‚—
— ƒ\\— —$ŠŠƒ$ˆ‹ššŒ—
–" "ˆŠ_$""_"$Šƒ\†` ˆ$ "\_"ˆ_—º$Šˆ†!!›“!š„““— ¢ —— º——
_† \ —— $ ‹ššŒ— $™ _  Š ™™›Š"$\™\Š"_""\Š_ˆ ˆ™†— Š"_ˆˆ!›•“š„•š“— $ˆ — — ƒ† \ — $ ‹šš‘Œ—  "_ "\  "$  ˆ \$ˆ  ™ Ÿ$\ _ˆ \ˆ ‚
‡š‘ ¼‚"$   ˆ†½—``—„¥“‚‚$`
_— \ˆ—º———
\\º——_"‹š‘Œ—"–`ˆ_$" Š „\ ˆ ƒ_\ ƒ† _†ƒ\ — \ˆ Š _ 

\"†Š‚ ‚ ‘”›“¥„““— † — — — º"† \ —— ‚ ‹!”””Œ— ‚ˆˆ `_Ÿ† \  "_ ™™\Ÿ$\$ƒ†`__—$ˆ†”›‘„‘‘— $¢ — — žˆ —   \ ž— ˆ ‹!””Œ— $" $ "† Š   ˆˆ Š _ "$ \_  "†— _" \ `_† _""$!‘˜›‘„!‘— † ‚— — $ ž— ` ‚—  — $ —  — ƒ†
—
_†

—žŠ\
——\‡_‹!””Œ—£†ˆŸ_Š`""†\$ˆ ™`_`in vitro—–`"_!‘›!˜„!!š— ˆƒ—— ‹!””!Œ—
_ˆˆ \ _ $ `  –$ "–  ˆˆ\\™$`_†ˆ†—$_š›‘““„‘‘“— £——\—Š_„‹ššŒ—ˆ\\†`$‹„! `ˆ Œ "ˆ¤  "\ †" Š _ $\† Š  "ˆ  _ \™`ˆ  ™$†"—™`"‚$``"›!š„!!˜— £` —— — „ \ — ¢$„\ ‹!””Œ— Ÿ_ Š ƒ$  ˆ` ¡$`†¡$†„\$\!¯Ÿ™`_— º$Š‚ ¥›¥‘˜„š˜— £$™$¢ˆ$‚—£——— — —
\£—©†ˆ$¢‹!”””Œ—\_ "ˆ$Š"\Š\Ÿ_""ƒ \\_™``\—"!› “!˜„“— $ŠŠƒ$ˆ— ———\ŠŠ_‹!””Œ—_‡ˆ`$$\_¾ˆ  \™`" \ $ ˆˆ— \ˆ Š _  \"† Š ‚ ‚ š‘›¥!‘!„¥!‘¥—
__Ÿ — \ — — $ŠŠƒ$ˆ ‹šš‘Œ— $ˆ ‹\ $ˆŒ  "ˆ—
`†__ˆ†¥›˜‘„•‘—
 ‚— —
 — " „
$ — —  \ —
  ‹!”””Œ—   _ "™›\ˆ$ƒŸ` \"†— 
Š¥š›‘š„š•—
$† ¸— \ —‚— ƒ¢ ‹!””Œ— _ "` Š ¼_ `½   ˆ„ƒ\ $""\—º$Š_ˆ†!!¥›!˜„“— ¢ ‚—— º—— Š$
—ž— ƒˆ — — $ŠŠƒ$ˆ \ —— žŸ  ‹šš“Œ— ˆ„ˆ\ ƒ\ˆ `` ˆ™  "ˆ `\ _$ˆ_ „$ƒ$" \_™— $‘˜›˜“„˜¥”— $—‚—†
—
_† —$º—™™—
$`_†——ƒ† — Š$" \
—— \‡_ ‹šššŒ—  Š ˆ  "\ˆ  ™ ™ `_Ÿ$\`—º$Š‚!›!¥„!˜!— "† — º——
 \ — $ ‹!””Œ— _†„ƒ¡„\  "$ Š  \Š" \ "ˆ— ›  —
— _`
— ƒ \ º—   ‹\Œ— †" \  \†"„
$"\ˆ \ $" "$— ``— !˜„‘— ¢_¿$—  »— — † \ — $ ‹!”””Œ— $™ $\† Š \†" ƒ_™ Š  "†\$ˆ™Ÿ$\_ˆƒ†`ŠŸ†—†"†¥›š„”—

     
 

•

‚™ — ——  \ —
—  ‹!””¥Œ—
_" "\ˆ Š Ÿ† `_ Ÿ$\$\$ˆ†"_—º$Š ``\_†ˆ†š•›˜••„˜“¥— ‚_™" ‚—¸— ž—‚— † —
—  \ — — $ŠŠƒ$ˆ ‹!””Œ— ‚` ˆ Š $ ˆˆ› "\ˆ \ "`$ †— `_† º$ ‘› ‘˜¥„„‘•“— ‚——\— ‹šššŒ—Ÿ„\_„\""`$†"Š† ˆ_Ÿ "  Ÿ— › ‚ — — \ —  ‹\Œ—
 † Š ™ˆ — ``—!•„˜!—†„\— º—ž—‚_\—
—‚ "‹!””Œ—
„`ˆŠŠ$Š$_ Š`†"`_$$¢†"ˆ—`_†º$‘›!˜•š„!˜“š— $—\—$‹!”””Œ—
_ˆˆ\ˆˆ›_ˆŠ „–$"–$`ˆ"`\$\‡ \‰"\‚‚‰ !!›„“— _‰ — »—  — $ ¸—  \ — $ ‹šš“Œ—  ™ ˆˆ  "\$\ ƒ† _ "_ `` Š Šƒ ˆ \  \  βv β3  ˆ  — $\™`"ˆ† "›“•„““—  º— \ — — \ ‹š“‘Œ—  "` Š _ "ˆ ` Š " \ "ˆŸ††"— "º$Š_ˆ†š”›˜š„“!—  —— \
—— \ ‹!””!Œ— Ÿ _ˆ  ™ Š † Š  "™"Ÿ_ˆˆ
–ˆ†!›••„••š— ©_"º—
—ž—£` ——ž\———‚"\—$_‹šš“Œ—  "ˆ \ `Š \$ˆ _  ™ Ÿ$\ ` Š _ `† `_$"—
†\_†¢“›²¥—